【佳學(xué)基因檢測】單基因病的胚胎植入前基因檢測（PGT-M)

用于單基因疾病的PGT（PGT-M）賊初設(shè)計用于出生時出現(xiàn)的單基因疾病，如囊性纖維化和X連鎖疾病，賊初似乎不實用，應(yīng)用非常有限，導(dǎo)致在應(yīng)用的頭幾年僅出生了幾個嬰兒。此外，報告了幾例誤診，這是由于先前未知的優(yōu)先擴增現(xiàn)象或等位基因特異性擴增失?。ǖ任换蛉笔DO），需要制定一種特殊的方案來高效檢測。

ADO的高發(fā)生率可能明顯導(dǎo)致誤診，特別是在復(fù)合雜合子胚胎中，因此PGT-M的高效性取決于檢測ADO的能力，ADO的檢測能力似乎隨著不同的裂解程序、細胞類型以及可能分析的位點而變化。因此，設(shè)計一種高效的檢測潛在ADO的方法，作為避免PGT-M誤診的有效工具，具有重要意義。該方法的主要原理是通過在先進輪PCR中引入突變基因和多態(tài)性標記的所有外部引物的混合物，同時擴增致病基因和連鎖多態(tài)性標記。然后用第二輪PCR中每個位點的特異性內(nèi)部引物，以更高的嚴格度擴增先進輪PCR的PCR產(chǎn)物的單獨等分試樣。這種雙重或多重放大允許檢測大多數(shù)ADO發(fā)生。因此，多重擴增允許檢測ADO作為防止移植誤診胚胎的手段。每增加一個連鎖標記可以將誤診率降低一半，因此，如果一個連鎖標志與突變一起擴增，誤診率可能從20%降至10%，兩個從10%降至5%，三個從5%降至幾乎為零。只有當多態(tài)位點和突變一致時，胚胎才被移植。因此，多重擴增可以檢測ADO并防止移植被誤診的受影響胚胎。

目前，檢測ADO的重要性似乎更為重要，WGA被廣泛用作PGD-M的先進步，因為WGA可顯著提高所有類型活檢細胞的ADO率。即使轉(zhuǎn)移到囊胚活檢，允許檢測多達5個細胞，WGA后ADO率幾乎翻了一番，因此增加了誤診的風險。然而，通過在WGA后的新穎PGT-M系統(tǒng)經(jīng)驗中應(yīng)用上述方法，在PGD-M中未觀察到誤診，盡管設(shè)計更有效的WGA程序以有效避免與WGA相關(guān)的潛在ADO仍然是一個真正的挑戰(zhàn)。另一種方法是多重位移放大（MDA），它用于核定位，然而，它仍然易于ADO。WGA和MDA的現(xiàn)有經(jīng)驗表明，ADO仍可能導(dǎo)致誤診，需要特定的個性化PGT設(shè)計，這也是基于世界上賊大系列PGT-M的經(jīng)驗。

值得注意的是，為每對夫婦制定特殊的PGT-M設(shè)計仍需要準備工作，這可能還涉及建立父系單倍型所需的單個精子分型，因此除了突變測試外，還可以進行更有效的連鎖標記分析，這對于父系顯性條件的PGT尤為重要。目前，在不進行直接突變測試的情況下對PGT-M進行單體型分析是一種更普遍的方法，也稱為“植入前遺傳單體型分析”（PGH）。親本單倍型的可用性不僅可以確認突變基因的缺失，還可以確認PGT-M中母系和父系野生等位基因的存在。這種方法也有局限性，因為家長分析并不總是可用的。

賊近引入的核定位方法也是為PGD-M設(shè)計的，不需要測試致病基因，也有一個組合的PGT-a。然而，核定位并不是普遍適用于每一個PGT-M病例，例如父母雙方都無法進行分析，或者兩人在高度血緣背景下都具有相同的隱性突變，或者請求PGT-M的患者中有一人具有從頭突變（DNM），這代表了該方法的重要局限性。生殖遺傳學(xué)基因檢測的臨床數(shù)據(jù)分析了2780對夫婦的PGT－M系列的結(jié)果，結(jié)果表明，染色體定位可能不適用于多達三分之一的涉及PGT-M的家庭。由于PGH和細胞核定位都需要在應(yīng)用于PGT周期之前進行家族研究以建立聯(lián)系，因此需要潛在父母的一級親屬的可用性以及家族成員中家族疾病相關(guān)DNA變異的直接分析。

在父母或患病兒童中檢測到的DNM的PGT中，特殊家族設(shè)計的發(fā)展尤為重要，因為無論是起源還是相關(guān)的單倍型都無法用于追蹤從胚胎或卵母細胞活檢的單個或多個細胞中DNM的遺傳。越來越多的夫婦在沒有任何遺傳病家族史的情況下申請PGT-M，因為這是在父母之一或患病的孩子身上新穎診斷出來的。這包括在PGT前對父母和患病兒童進行DNA分析，包括突變驗證、多態(tài)性標記評估、建立正常和突變單倍型的完整和單精子測試，以及通過極體分析和/或胚胎活檢進行PGD。盡管策略可能因DNM遺傳類型而異，但一般方法包括確定DNM起源，并尋找可能的性腺嵌合體和相關(guān)的親本單倍型。其中一個重要步驟是單精子分型，以排除可能的性腺嵌合體。即使未鑒定出DNM，單精子分型也可能鑒定出一種“良性”突變單倍型，即不含DNM的突變單體型。另一項重要要求是確定父母雙方的相關(guān)關(guān)聯(lián)MARkers，即使只有一方是DNM攜帶者。雖然并非總是可行，但通過PB進行PGD檢測或確認母體正常和突變單倍型始終是先進方法。

在涉及母系和父系顯性、隱性或X連鎖DNM的大系列中，新穎對DNM進行系統(tǒng)的PGT，證明這些家庭的PGT-M策略取決于DNM的父母來源，并包括在PGT之前對父母和受影響兒童進行廣泛的DNA分析。這涉及突變驗證、多態(tài)性標記評估、全精子和單精子測試或PB分析，以建立正常和突變單倍型，如前所述，沒有這些單倍型就無法進行DNM的PGT。盡管針對DNM的PGT非常復(fù)雜，但應(yīng)用的策略似乎非常正確，這使其成為PGT-M實踐的有益補充，可以提供給任何有風險的夫婦，而不管家庭數(shù)據(jù)是否可用。

盡管PGD-M仍然主要針對特定疾病進行設(shè)計，但也使用了一種綜合方法來同時測試兩個或多個疾病，還結(jié)合了染色體異倍性和易位的伴隨測試。請閱讀佳學(xué)基因相關(guān)內(nèi)容以做更為詳細的了解。